近红外光谱法鉴别真伪的应用

　　近红外光谱法鉴别真伪的应用一致性检验是一种快捷的图谱比较方法，用于比较未知光谱与某一组参考光谱是否具有一致性：首先计算参考光谱在每个波长点处吸光度的平均值和标准偏差，其次将每个波长点的平均值加减多少倍(即CI限度)标准偏差作为该波长点的可信区间;待测光谱在该波长点处的吸光度与参考光谱平均值的差值除以标准偏差，得到的就是一致性指数(conformityindex，CI)。根据待测样品光谱的CI值是否超过CI限度，即该光谱是否越过可信区间，可快速判断待测样品是否可疑[1]。本文利用近红外光谱测定和数据分析软件建立消渴丸的一致性检验模型，同时利用显微特征鉴别和高效液相色谱法，确定样品真伪，以进一步验证该模型的准确性。

　　1仪器与样品

　　1.1仪器

　　MatrixF近红外光谱仪、手持1.5m固体光纤探头(德国布鲁克光谱仪器公司);OPUS5.0光谱分析软件(德国布鲁克光谱仪器公司);LC20AT高效液相色谱仪(日本岛津);LeicaCME电光显微镜(德国徕卡公司)。

　　1.2样品

　　消渴丸**17批(编号：1-17，对应批号为MY0074、M07018、M01315、LY0077、L00677、K03189、M00279、MF0014、M01383、M01375、M01367、M01341、M00313、M00287、M07001、M00295、MO1354，均来自广州中一药业有限公司);标示消渴丸假冒品4批(编号：18-21，对应标示批号为：L00462、L00579、L03073、L05628)。

　　2实验方法

　　2.1近红外光谱采集条件

　　扫描范围：4000～12000cm-1;扫描次数：32;分辨率：8cm-1;扫描速度：10kHz;以内置背景为参考;检测器设置：半导体制冷铟镓砷探测器;采样模式：漫反射方式;温度、湿度：22℃，60%。

　　2.2近红外光谱采集和处理

　　2.2.1取样品(浓缩水丸)，用锉刀锉成较光纤探头直径稍大的横截面，探头直接接触切面采集光谱，每批重复测定4次。在OPUS的一致性检验模型设置模块中，取编号1-14样品的近红外光谱作参考光谱，见图1。另取编号15-21样品近红外光谱作验证光谱，只选择矢量归一化预处理数据，取4061.7～8516.8cm-1谱段范围，设定CI限度为6，建立样品的一致性检验模型。

　　2.2.2在不同条件下近红外光谱采集，取编号14样品，按不同操作者，不同温度、湿度环境(22℃、60%，28℃、75%)，不同测量深度(截面大、中、小)采集光谱，各重复测定3次。

　　2.3显微特征鉴别

　　取编号8、18、19、20、21样品，磨粉，取适量制片，按2010年版《中国药典》[2]置显微镜下观察。

　　2.4高效液相色谱图

　　取编号8、18、19、20、21样品粉末，按2010年版《中国药典》“消渴丸”含量测定项下的方法[2]，扫描高效液相色谱图。

　　3结果

　　3.1**与假冒品近红外光谱图的区别

　　在OPUS中，将**与假冒品近红外原始光谱图矢量归一化预处理(见图2)。可见，编号19、20假冒品与**近红外光谱曲线差异较大，编号18、21假冒品与**的光谱图相似，但在4200、5500、

　　3.2建立一致性验证模型

　　取编号1-14样品的近红外光谱作建模参考光谱，另取编号15-21样品作为验证光谱，结果见图3。从图3可见，编号18-21假冒品均在所设定的CI限度以上，超出建模样品光谱图的可信区间;验证编号15-17**在CI限度以下，跟建模样品一致。验证的结果与样品实际情况相符。

　　3.3模型耐用性验证

　　取在不同条件下近红外光谱作为验证光谱，结果见图4。不同操作者，不同温度、湿度环境，不同测量深度等变化下测定的光谱，经计算均在所设定的CI限度之下。验证结果说明上述因素变化对模型判别影响不大。

　　3.4显微鉴别结果

　　对编号8、18-21样品进行显微特征观察后发现，编号8样品(**)符合《中国药典》描述的显微特征;编号18-21样品(假冒品)部分具有《中国药典》描述的显微特征，但同时可见掺有大量无机物，显微特征与**有明显不同;另外，编号18样品可见葛根显微特征,属于标准规定外的显微特征。

　　3.5高效液相色谱图的差异

　　为进一步求证，取消渴丸**和假冒品扫描高效液相色谱图，见图5。从图可见，编号8样品(**)在保留时间9.60min处有色谱特征峰，编号18假冒品有特征峰，编号18-21假冒品在9.6min没有特征峰。

　　4讨论

　　4.1近红外光谱检测属于无污染和无损伤低碳环保检测技术，样品不需特别的预处理，不使用有毒有害试剂;扫描过程迅速，数十秒内获得一个样品的全光谱图;通过数据分析软件可以很快建立各种数学模型，在不同情况中使用[3]。

　　4.2一致性检验是一种近红外光谱定性检测方法，在打击假冒药品时有较好的专属性、准确性，但模型建立需要一定代表性的参考光谱，事先需要准备一定量的样品[1，4]。

　　4.3药品的近红外图谱是活性成分和辅料的叠加图谱，不管是活性成分改变还是辅料改变，近红外图谱都将发生改变[5]。显微鉴别时，某假冒品和**同样都具有药材的显微特征，但如果辅料不同，近红外图谱仍有较大差异。

　　4.4通过扫描高效液相色谱图，发现假冒品(编号18)和**在保留时间9.6min左右有相同的色谱峰(葛根素)，高效液相色谱图有相似点，但是通过显微特征和近红外图谱分析，可以将两者区分，筛选出假冒品。随着药品造假手段越来越高明，多种检验技术的采用可从多个层面验证药品的真假。